ISH-武漢思特進

根據不同的雜交實驗要求，應選擇不同的核酸探針。在大多數情況下，可以選擇克0隆的dna或cdna雙鏈探針。但是在有些情況下，必須選用其它類型的探針如寡核苷酸探針和rna探針。例如，在檢測靶序列上的單個堿基改變時應選用寡核苷酸探針，在檢測單鏈靶序列時應選用與其互補的dna單鏈探針（通過克0隆人m13噬菌體dna獲得）或rna探針，ish，寡核苷酸探針也可。長的雙鏈dna探針特異性較強，適宜檢測復雜的靶核苷酸序列和病原體 ，但不適宜于組織原位雜交，因為它不易透過細胞膜進入胞內或核內。在這種情況下，寡核苷酸探針和短的pcr標記探針（80～150bp）具有較大的優(yōu)越性。
雜交液中的陽離子濃度通過靜電排斥作用影響了雜交體之間的鏈穩(wěn)定性，較高的鹽濃度將增加雜交體的穩(wěn)定性。大于0.4m的na離子濃度，對tm值、雙鏈復性速率的影響不大，但隨著na離子濃度的降低，將顯著影響tm值和雙鏈復性速率。
有2機溶2劑（甲酰胺）的作用是降低dna-dna和dna-rna等雙鏈體的解鏈溫度。通常dna需要在0.1~0.2m na 90~100℃的條件下變性，那么應用于原位雜交，樣品必須在65~75℃的條件下進行長時間變性，這將導致樣品形態(tài)學的*。50%甲酰胺的應用能將雜交溫度降至30~45℃。
*葡聚糖具有很強的水合性，高濃度的*葡聚糖會使得核酸分子無法獲得周邊親水環(huán)境，增加了探針濃度，加快雜交反應速率。
原位雜交是指；分子雜交的一種形式。由未經抽提分離的染色體dna，在原來位置上被變性成單鏈后，與探針進行分子雜交。1977年由本頓(w.d.be*n)和戴維斯(r.w.d*is)在原分子雜交基礎上發(fā)展的一種較新的分子雜交技術。方法是將菌落或噬菌斑轉移到硝9酸纖維素濾膜上，使在原位發(fā)生溶菌后變性的dna，同濾膜原位結合，再與有放5射性同位素標記的特定核苷酸“探針”雜交，其結果可用放5射自顯影來顯示，出現銀粒的地方便是待測染色體dna上與探針互補順序所在的位置。對快速檢測轉化群落中的dna序列或任何一種插入的dna序列，以及動植物的*定位工作，都具有廣泛應用價值。(見“分子雜交”、“放5射自顯影”、“影印培養(yǎng)技術”)
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