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友名生物公司-湖北腺病毒濃縮

腺病毒載體的構建經歷了體外直接連接、包裝細胞內重組、*內重組、位點特異性重組4個發展階段,同時隨著分子生物學技術的發展,改進的體外連接法又得到應用。
體外連接法。這種方法需要全長腺病毒*組和一個含腺病毒*組左末端序列的質粒,包括左端反向末端重復(inverted terminal repeat,itr)、包裝信號和e1a的增強子序列。將目的*克1隆到質粒的病毒序列下游,clai酶切獲得含目的*的*組左末端,連接到clai酶解的野1生型腺病毒*組(clai在病毒*組僅有一個酶切位點,位于e1a*內部),將得到的含目的*的的*組dna直接轉染包裝細胞293,產生重組病毒顆粒。這種方法需要培養野1生型腺病毒以提取病毒*組,能夠使用的酶切位點僅有一個,連接效率低,而且僅刪除了部分e1a*,外源*載量有限,所以現已淘汰不用。
植物的遺傳轉化是以植物器1官、組織、細胞或原生質體作為受體,通過某種技術或途徑轉入外源*,獲得外源*穩定表達的可育植株。遺傳轉化可以打*物種界限,有目的地實現物種之間或物種內部遺傳物質的交流,為植物的遺傳改良開辟了一條新的途徑。
植物遺傳轉化方法就是通過特定的方式將外源*導入到受體細胞內,使之發生定向的遺傳變異。目前,已經建立了多種轉化系統。對于大多數遺傳轉化系統而言,遺傳轉化方法是遺傳轉化系統的關鍵環節,決定著轉化的成敗及效率。用于植物的遺傳轉化方法有許多:農桿1菌介導法、*槍法和peg法等。
在轉*植物中,腺病毒濃縮,用農桿1菌介導法獲得的轉*植物占80%,但大多集中在雙子葉植物上。自從*槍問世以后,單子葉植物中的禾谷類作物的遺傳轉化獲得了迅速發展。農桿1菌介導法和*槍法已成為目前用于遺傳轉化的主要方法。
農bacillus轉化法
農bacillus包括引起植物冠癭瘤的根*農bacillus和引起發根病的發根農桿1菌。根*農桿1菌和發根農bacillus有相似的遺傳背景。在農bacillus介導的轉化中,80%左右是由根*農bacillus介導的,大約20%是由發根農bacillus介導的。這里主要介紹根*農桿1菌介導的轉化。
根*農bacillusti質粒上有一段轉移dna(t-dna)和vir區,在農bacillus侵染植物時,這段t-dna可以插入到植物*組中,使其攜帶的*在植物中得以表達。vir區共24個*,它們表達的蛋白與t-dna的加工和轉移有關。
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